De Minions bestaan al sinds het begin van de evolutie. Van een geel eencellig organisme zijn ze uitgegroeid tot wezens met slechts één doel: het dienen van de meest ambitieuze schurken. Wanneer hun meesters vernietigd worden besluiten ze zich te isoleren van de wereld en te verkassen naar Antarctica. Ergens in de jaren zestig drijft het ontbreken van een leider hen echter tot waanzin. Ze besluiten daarom een nieuwe te gaan zoeken.

Gru moet het opnemen tegen Balthazar Bratt, een voormalig kindsterretje dat geobsedeerd is door het personage dat hij in de jaren 80 speelde. Balthazar heeft het dit keer gemunt op een groot schip. Daarnaast ontstaat er de nodige rivaliteit wanneer hij zijn lang verloren gewaande tweelingbroer Dru ontmoet.

Als fan van een superschurkengroep die bekend staat als de Vicious 6, bedenkt Gru een plan om kwaadaardig genoeg te worden om zich bij hen aan te sluiten, met de steun van zijn volgelingen, de Minions.